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一文與您分享JP標準品的實驗步驟
  • 更新日期:2023-02-07      瀏覽次數:588
    •   JP標準品的一種或多種特性值是按一個特定的程序確定的,這個程序可以確定每個特性值能夠溯源到可以準確地實現表示其特性值測量單位,并且每個被確認的特性值都附有規定置信區間的不確定度限值。
       
        下面咱們來了解下JP標準品的實驗步驟:
       
        1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
       
        2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜,37℃反應60分鐘。
       
        3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
       
        4.每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液)100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
       
        5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
       
        6.依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
       
        7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
       
        8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。第二抗體是能和抗體結合的,即抗體的抗體。主要用于檢測抗體的存在。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長,互相爭奪營養和空間,而產生抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。
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